1981年，出演第一部电影《泉水叮咚》，接着加入上海电视台小荧星艺术团。1988年出演电影《荒雪》。1990年，初二那年被特招进入上海儿艺，又经过三年的京剧武打训练、参与了700多场次的舞台剧演出。1993年在电影《第一诱惑》中饰演小浩。1999年夏天，陆毅带着他的毕业大戏《家》和小剧场话剧《庄周戏妻》进京演出，《家》中的觉新和《庄周戏妻》中的楚王孙，这两个相去甚远的角色充分展示了陆毅的表演功底。1999年，还没大学毕业的陆毅接拍了海岩剧《永不瞑目》，并且凭借《永不瞑目》获得2000年中国电视剧金鹰奖最佳男主角 及观众最喜爱的男演员两项奖项 。2000年，出演赵宝刚的年代大型电视剧《像雾像雨又像风》，并获得最受台湾观众欢迎的“深情男士”奖。 2001年，首次主演古装电视剧《少年包青天2》 ，同年主演青春偶像剧《海洋馆的约会》。 2002年，参加中央电视台春节联欢晚会，与周迅合唱歌曲《今年如此精彩》。 主演由著名导演唐季礼执导的首部足球题材电视剧《壮志雄心》并演唱同名主题曲。 同年参演反腐题材电视剧《浮华背后》，同年2月首次主演电影《一见钟情》。2003年，与林心如主演时装爱情青春偶像剧《男才女貌》，此剧在CCTV8套首播时收视成绩在央视电视剧节目中排名第一。 同年6月，发布第一张音乐专辑《非同寻常》。 2004年，与章子怡合作出演电影《茉莉花开》，出演电视剧《向左走向右走》。 2005年，与赵薇合作出演爱情文艺电影《情人结》 ，并获得第8届上海国际电影节最佳男演员和第8届中国长春电影节最佳男演员提名。同年参演徐克执导武侠电影《七剑》 。同年3月7日陆毅在北京正式推出他的第二张专辑《毅犹未尽》，获得多项音乐奖项。 2007年后，主演了王文杰执导的古装历史题材电视剧《大槐树》《苏东坡》，随后又和赵宝刚合作了谍战剧《夜幕下的哈尔滨》并获得第3届BQ红人榜年度最受欢迎男演员。 2008年出演电视剧《我的青春谁做主》。2009年，出演大型古装电视剧《三国》饰演诸葛亮 ，并参演《美丽密令》《唐山大地震》《线人》《跟我的前妻谈恋爱》等不同类型电影。2010年主演中韩合拍电视剧《天堂秀》，该剧为中韩建交20周年献礼剧 。2011年主演谍战题材电视剧《掩护》 ，同年在主演的电影《甲午大海战》中饰演邓世昌。 2012年主演的大型历史战争电影《甲午大海战》 和电影《新妈妈再爱我一次》上映，并主演电视剧《假如生活欺骗了你》 。10月，主演的历史传记剧《苏东坡》上星播出，被广电总局推荐为优秀电视剧 。2013年参与电视剧《大汉情缘之云中歌》等的拍摄 ，主演电影《英雄之战》 。同年8月，陆毅主演的电视剧《假如生活欺骗了你》于多家卫视热播 ，此剧获上海电视节白玉兰奖金奖 ，并获得BQ红人榜年度突破演员 。2014年3月21日其主演的电影《英雄之战》上映。 4月电视剧《宫锁连城》在湖南卫视播出 。并主演青春励志医疗剧《长大》 。2014年陆毅携女儿参与湖南卫视节目《爸爸去哪儿2》。 2015年1月29日，主演的青春励志剧《长大》上星热播 。2月19（大年初一）《爸爸去哪儿2》大电影上映。2015年02月17日，参加2015年中央电视台春节联欢晚会，表演歌曲《幸福家家有》 ；参与电视剧《致单身男女》的拍摄 。携妻子鲍蕾作为常驻嘉宾加盟夫妻真人秀《为她而战》。8月陆毅主演的谍战剧《胭脂》开拍。 其早年主演的《血色童心》获由俄罗斯总统普京亲自签发的“伟大卫国战争胜利70周年纪念奖章”。加盟中韩竞技综艺节目《中韩梦之队》担任中国队队长。 9月，陆毅参演的《大汉情缘之云中歌》与古装历史剧《秦时明月》先后在湖南卫视钻石独播剧场播出。 2016年初其主演的检查题材反腐电视剧《人民的名义》开拍。