1986年导演谢铁骊启动电影《红楼梦》，共六部八集的电影拍摄历时3年，招入了 越剧、京剧、吕剧等不同剧种的演员，何赛飞便是其中之一。片中她饰演妙玉，这是她走上银幕的开始。1994年何赛飞拍摄了李少红执导的电影《红粉》和陈凯歌执导的电影《风月》。在《红粉》中，她饰演青楼女子小萼，演得不温不火、恰当好处， 这部影片也进一步提高了她的知名度。 1995年她获得中国电影表演艺术学会奖。1996年她凭借在《敌后武工队》中的表演获得第19届大众电影百花奖最佳女配角奖；同年接拍了电视剧《情系国脉》、《汉口往事》、《昨日留言》。 2000年，她接拍了20集电视剧《爱是阳光》，并在剧中任女主角。 2001年，在郭宝昌导演的电视剧《大宅门》中饰演名妓杨九红，凭借在这部电视剧中的表现，何赛飞获得中央电视台美菱杯“观众最喜爱的十佳女演员奖”。 2004年出演电视剧《月影风荷》，饰演季文月一角 。2005年加盟上海滑稽剧团。2007年12月，何赛飞到宁波出演滑稽戏《太太万岁》；同年主演电视剧《江湖兄弟》，剧中何赛飞与施羽出演一对在江湖中飘泊的恋人 。2008年与汤唯、梁朝伟合作出演李安导演的电影《色戒》；饰演萧太太一角。2010年主演电视剧《老马家的幸福往事》 。2011年，主演电视剧《后宫》，剧中何赛飞饰演的明宪宗的生母周太后。 2012年出演电视剧《唐宫燕》，饰演唐中宗李显的妻子韦皇后 。2013年与佟丽娅 、杨烁合作出演电视剧《刀客家族的女人》 ；4月，何赛飞主演的电视剧《那金花和她的女婿》在全国各大卫视黄金档播出。 2015年，加盟主演抗战片《那些女人》，饰演水芹妈 。